隐球菌抗原检测可能产生假阳性、假阴性的原因

假阳性

隐球菌抗原检测产生假阳性的原因包括可能与毛孢子菌、粘滑口腔球菌、玉米黑粉菌、巴西副球孢子菌等产生交叉反应，以及高浓度的人抗小鼠抗体等。

毛孢子菌（Trichosporon）

白吉利毛孢子菌（Trichosporon beigelii）

1985年McManus等^[1]报道了一例隐球菌抗原检测（乳胶凝集法）（IM Inc, American Microscan, Lexington, Ky.）与白吉利毛孢子菌产生交叉反应的病例。一例骨髓移植受体发生白吉利毛孢子菌播散性感染，其血清经隐球菌抗原检测（乳胶凝集法）呈阳性。患者死亡时隐球菌抗原（乳胶凝集法）滴度升至1:2560。尸检确诊毛孢子菌感染，未发现新生隐球菌。患者样本的细胞壁提取物和另外两株白吉利毛孢子菌与隐球菌抗原检测（乳胶凝集法）发生交叉反应。应谨慎解读来自白吉利毛孢子菌血或组织活检培养阳性免疫抑制患者的隐球菌抗原检测（乳胶凝集法）血清阳性的结果。

真皮毛孢子菌（Trichosporon dermatis）

2009年Fekkar等^[2]报道了一例隐球菌抗原检测（CALAS，乳胶凝集法，Meridian Bioscience）与真皮毛孢子菌产生交叉反应的病例。患者发育不全，脐带血移植后，多部位样本毛孢子菌培养阳性，发生了严重的播散性感染。CT有毛玻璃影，但不符合曲霉菌病的影像学特征。多次血清样本GM检测和隐球菌抗原检测（CALAS，乳胶凝集法）阳性。未达到曲霉菌病或隐球菌病的确诊、极似诊断和拟诊的标准。考虑不是毛孢子菌、曲霉菌、隐球菌共感染。可能真皮毛孢子菌产生的抗原与隐球菌和曲霉菌有共同的表位。作者验证了真皮毛孢子菌的培养上清液可与曲霉菌和隐球菌发生交叉反应。

阿萨希毛孢子菌（Trichosporon asahii）

2015年Rivet-Danon等^[3]报道了两例隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）（CrAg LFA， IMMY）与阿萨希毛孢子菌产生的交叉反应。非隐球菌侵袭性真菌感染（II组）中包含阿萨希毛孢子菌（2个患者：2例血清，1例脑脊液）、组织胞浆菌（2个患者：2例血清）、烟曲霉菌（4个患者：4例血清）、耶氏肺孢子菌（3个患者，3例血清）、白色念珠菌（3个患者：3例血清）、红酵母菌（3个患者：3例血清）。其中2例隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）（CrAg LFA， IMMY）假阳性与毛孢子菌菌血症有关。

表1| 不同试剂盒检测不同组别患者的结果

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粘滑口腔球菌（Stomatococcus mucilaginosus）

1993年Chanock等^[4]报道了一个29月大女孩，四期非霍奇金淋巴瘤复发，存在嗜中性粒细胞减少症、持续发热和神经性改变。脑脊液多次隐球菌抗原检测（CALAS，乳胶凝集法，Meridian Bioscience）滴度1:64，培养结果显示粘滑口腔球菌阳性。13天后因进行性脑膜炎和神经系统并发症死亡。怀疑粘滑口腔球菌与隐球菌抗原检测（CALAS，乳胶凝集法，Meridian Bioscience）存在交叉反应。经验证，7株粘滑口腔球菌培养菌悬液经隐球菌抗原检测（CALAS，乳胶凝集法，Meridian Bioscience），滴度为1:32。

玉米黑粉菌（Ustilago maydis）

2017年Cheng等^[5]使用各病原体（表2）的临床分离物，经培养后检测菌悬液，发现阿萨希毛孢子菌和玉米黑粉菌与隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）（CrAg LFA，IMMY）产生假阳性结果。

表2 | 不同样本分离物检测结果

巴西副球孢子菌（Paracoccidiodes brasiliensis）

来自CrAg LFA说明书“交叉反应”部分：高浓度（>0.1 mg/mL）的巴西副球孢子菌会产生一定的交叉反应。

人抗小鼠抗体（HAMA）

来自CrAg LFA说明书“检测局限性”部分：患者高水平(>40 ug/mL) 的人抗小鼠抗体（HAMA）可能产生假阳性结果。

其他

有文献也汇总了其他一些可能导致隐球菌抗原检测（乳胶凝集法）产生假阳性的原因。（表3^[6]）

表3 | 隐球菌抗原检测（乳胶凝集法）产生假阳性的原因

假阴性

导致隐球菌抗原检测假阴性的原因包括发病早期、载菌量较低、隐球菌抗原浓度低于检出限以及隐球菌菌株荚膜小或无荚膜等。

荚膜小或无荚膜

2016年Mahajan等^[7]报道了一例63岁男性，4年进行性行走障碍、头痛、交通性脑积水。

使用隐球菌抗原检测（Remel，乳胶凝集法）和隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）（CrAg LFA，IMMY）检测多次腰穿获得的脑脊液，结果均为阴性。滴度稀释排除了后带现象。MALDI-TOF鉴定为新生隐球菌。大体积的脑脊液培养长出无荚膜的隐球菌。原始菌株再培养，长出有荚膜的隐球菌。

表4 | 多次腰穿检查结果

图1 | （a）墨汁染色：原始培养无荚膜菌落，（b）墨汁染色：菌落再培养长出荚膜（1000倍放大），（c）沙保氏培养基上的原始菌落：粗糙且小的菌落形态，（d）再培养菌落：大量荚膜，典型的大菌落形态

后带现象（postzone）

CrAg LFA说明书中关于“后带现象”提到，特别高浓度（＞0.140mg/mL）的隐球菌抗原会产生弱阳性结果，个别样本会产生阴性结果。

2020年Rutakingirwa等^[8]报道了三例HIV感染患者，指血或血清隐球菌抗原检测均为阳性。脑脊液隐球菌抗原检测均为阴性，其中两例在稀释后转为阳性，应为后带现象导致的假阴性；培养阳性。剩余一例脑脊液隐球菌抗原检测经稀释后仍为阴性，培养也为阴性。隐球菌脑膜炎中隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）后带现象的发生率约为0.6%。

图2 | 前带、后带现象原理示意图

2020年Xu等^[9]报道了一例非HIV感染患者，发生了播散性隐球菌病，经隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）血清为阴性。菌株分离后经VITEK2鉴定为新生隐球菌。血清1:5稀释后经隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）结果为阴性，1:10和1:20稀释后为弱阳性，1:40稀释后为阳性，确定为后带现象导致的假阴性。作者同时汇总了近年来隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）目前涉及假阴性的报道。由于后带现象导致的假阴性不常见，表5汇总了5篇报道涉及的8个病例。

表5 | 近年隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）假阴性的报道

参考文献：

[1] Edward J. McManus, Jeffrey M. Jones. Detection of a Trichosporon beigelii Antigen Cross-Reactive with Cryptococcus neoformans Capsular Polysaccharide in Serum from a Patient with Disseminated Trichosporon Infection. J Clin Microbiol. 1985;21(5):681-5.

[2] A Fekkar, S Brun, M D'Ussel, et al. Serum Cross-Reactivity with Aspergillus Galactomannan and Cryptococcal Antigen during Fatal Disseminated Trichosporon dermatis Infection. Clin Infect Dis. 2009;49(9):1457-8.

[3] Diane Rivet-Danon, Juliette Guitard, Frederic Grenouillet, et al. Rapid diagnosis of cryptococcosis using an antigen detection immunochromatographic test. J Infect. 2015;70(5):499-503.

[4] Stephen J Chanock, Phillip Toltzis, Craig Wilson. Cross-reactivity between Stomatococcus mucilaginosus and latex agglutination for cryptococcal antigen. Lancet. 1993;342(8879):1119-20.

[5] Matthew P. Cheng, Tien T. Nguyen, Leighanne O. Parkes, et al. Cross-Reacting Ustilago maydis Causing False-Positive Cryptococcal Antigen Test Results. J Clin Microbiol. 2017; 55:3135-3137. 

[6] Zaheera J. Soni, Gary Reubenson, Tim De Maayer, et al. Neonatal Cryptococcosis- Beware of False-positive Results. J Pediatric Infect Dis Soc. 2012;1(3):250-3.

[7] Kedar R. Mahajan, Amity L. Roberts, Mark T. Curtis, et al. Diagnostic Challenges of Cryptococcus neoformans in an Immunocompetent Individual Masquerading as Chronic Hydrocephalus. Case Rep Neurol Med. 2016;7381943.

[8] Morris K. Rutakingirwa, Tadeo K. Kiiza, Joshua Rhein. “False negative” CSF cryptococcal antigen with clinical meningitis: Case reports and review of literature. Med Mycol Case Rep. 2020;29:29-31.

[9] Yuqiao Xu, Wenying Xia, Fang Ni. False-Negative Serum Cryptococcal Antigen Lateral Flow Immunoassay Result for a Patient with Disseminated Cryptococcal Disease. Infect Drug Resist. 2020;13:2877-2881.